- FLIM, FRET, FCS的交鑰匙系統
- 緊湊、易用、免維護的組件，所有的升級系統各個配置都高度模塊化，具有無限的靈活性
- 最大4通道獨立探測模塊的高靈敏系統
- 熒光壽命探測范圍從<100 ps到微秒級別
- 高端易用、匹配多種分析方式的數據收集和分析軟件
- 可用于各向異性和厚組織FLIM
- 新功能：rapidFLIMHiRes——利用超快FLIM成像和出色的5 ps時間分辨率實現動態過程可視化
激光掃描共聚焦顯微鏡（LSM）是生物化學，細胞生物學和其他相關生命科學領域中廣泛使用的工具。 通過使用時間分辨技術，可以進一步增強這些顯微鏡的功能，并具有以下優點：
該升級套件作為激光掃描顯微鏡升級部件，在增強了功能性的基礎上，更使整個系統簡單易用。作為交鑰匙系統，它主要包含三個單元:皮秒脈沖激發源，單分子靈敏度檢測器，以及時間相關單光子計數(TCSPC)模塊。
機械刺激時的細胞內 Ca2+ 信號傳遞
裝有 Oregon-Green-Bapta-1 的 HEK 細胞受到機械刺激后產生的細胞內 Ca2+ 信號。在這段視頻中，對上面兩個細胞進行了機械刺激前、刺激過程中和刺激后的成像。機械刺激導致細胞吸收鈣離子。Ca2+ 濃度的增加導致 OGB-1 AM 的熒光壽命發生變化，頂部兩個細胞在短時間內亮起綠光。rapidFLIMHiRes 方法能夠以每秒 5 幀 FLIM 的速度對 128 x 128 像素的樣品區域進行成像，從而能夠在短時間內定量觀察細胞中鈣離子濃度的上升。
樣品詳情：
實驗配置：
樣本和數據由 Rose 教授（德國杜塞爾多夫海因里希-海涅大學神經生物學研究所）提供
用rapidFLIMHiRes 監測膜張力的變化
這段視頻展示了用熒光探針 Fliper-TR®（熒光脂質張量報告）對細胞膜進行染色的 MDCK 細胞。該探針嵌入密閉環境后，熒光壽命會發生顯著變化。如果施加橫向壓力，Fliper-TR® 會發生平面化，從而導致熒光壽命的改變，這就可以對活細胞和人工膜中的脂質成分和膜張力進行成像。在等滲條件下，Fliper-TR® 的熒光壽命約為 5.1 ns。誘導高滲休克后，膜張力迅速降低，熒光壽命縮短。使用 rapidFLIMHiRes 方法進行成像的速度非?？?，因此可以實時記錄熒光壽命的變化以及膜張力的變化。
樣品詳情：
實驗配置：
參考文獻 Colom, A., Derivery, E., Soleimanpour, S. et al. A fluorescent membrane tension probe. Nature Chem 10, 1118-1125 (2018). https://doi.org/10.1038/s41557-018-0127-3
rapidFLIM - 重新定義動態FLIM成像標準
利用rapidFLIM熒光壽命成像技術，可以有效地對樣品的多種動態過程進行熒光壽命成像。該技術支持下的FLIM采集過程非常迅捷，可達到每秒幾幀的速度，適用于記錄樣品的動態過程（例如蛋白質相互作用，化學反應和離子流動），以及針對流動性高的樣品的進行成像（流動性高的細胞器或顆粒，細胞的遷移等），同時還可以用于研究熒光共振能量轉移的動態特性。最高每秒可獲取10幀以上，具體取決于樣本的亮度和圖像大小。
單層囊泡具有從巨型（GUVs）到大型（LUVs）甚至到小型（SUVs）等多種尺寸。囊泡膜的柔性結構允許引入特殊標記的脂質，從而使得它們非常適合在生物物理研究中作為研究對象。因此，這種囊泡成為了研究例如模結構域的形成或脂質組織的強大模型。
到目前為止，傳統獲取FLIM圖像都需要花費幾分鐘的時間，并且由于GUV的高移動性，很難對它們進行精確成像。應用rapidFLIM方法可顯著減少采集時間，每秒可記錄數幀。因此，即使是高度移動的GUV，也可以精確跟蹤。在該示例中，將兩個熒光團標記的脂質（C6-NBD-PC和N-Rhd-DOPE）摻入GUV中。在無相分離的GUV中，由于受體羅丹明的FRET過程，NBD（7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl）的壽命被強烈淬滅（低至約2 ns）。此處顯示的視頻包含300幀，以5.6 fps的幀率記錄。
樣品詳細：
具有NBD和羅丹明標記的脂質的GUVs（無相分離）：DOPC + 0.5 mol % Palmitoyl-C6-NBD-PC + 0.5 mol % N-Rhd-DOPE
NBD標記的Palmitoyl-C6-NBD-PC（磷脂酰膽堿）
羅丹明標記的N-Rhd-DOPE（二油基磷脂酰乙醇胺）
實驗配置：
GUV由柏林洪堡大學分子生物物理實驗室的Ivan Haralampiev制備
使用熒光壽命確定脂質順序
FLIM測量有助于區分有序和無序的膜相。在液相有序和無序之間變化時，膜染料Laurdan和di-4-ANEPPDHQ會發生熒光發射光譜藍移以及的壽命偏移，因此它們可以用來做膜序的成像。這些圖像通常采用歸一化強度比圖像的形式，通常稱之為廣義極化（GP）圖。在這里，通過時間相關單光子計數（TCSPC），利用已知的激發態光物理，可以來證明這兩個熒光探針的GP對比度的增強。該圖顯示了結合了壽命和光譜變化的Laurdan染色的固定BAEC細胞的GP圖。與內部細胞室（藍色）相比，細胞表面的質膜顯示出更高的階數（紅色）。
實驗配置：
結合了MicroTime 200和LSM升級套件（Leica TCS SP5）
激發光：800 nm的雙光子激發，SpectraPhysics MaiTai
分析軟件：SymPhoTime
澳大利亞新南威爾士大學血管研究中心Katharina Gaus提供
參考文獻：Owen et al., Microsc. Res. Tech. 73(6), (2010)|
激發系統 |
激光耦合臺，基于皮秒脈沖半導體激光器(功率/重復頻率可調, 最大80MHz) 375-900nm波長范圍 支持單通道或者多通道驅動 可選：支持外接第三方激光器 (如鈦藍寶石飛秒激光器和超連續譜激光器) 新品：采用LDH-D-TA-560的560 nm皮秒脈沖激發 |
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支持顯微鏡的廠家型號 |
Nikon：AX，A1, C2+, C2, C1si Olympus: FluoView FV3000, FVMPE-RS, FluoView FV1200 (MPE), FluoView FV1000 (MPE) Scientifica：VivoScope, HyperScope Zeiss：LSM 980, LSM 880, LSM 780, LSM 710 |
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探測方式 |
最多可支持4通道相互獨立的探測模塊 共聚焦和NDD配置 通過光纖與顯微鏡連接 |
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探測器 |
單光子雪崩二極管(SPAD) · 混合型光電倍增管(Hybrid-PMT) · 光電倍增管(PMT) |
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數據采集方式 |
基于時間相關單光子計數(TCSPC)的TTTR測量模式 · 多達四個通道的同時數據采集 |
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采集和軟件 |
SymPhoTime 64 NovaFLIM（新增軟件） |
